ClonExpress II One Step — это набор для клонирования любого фрагмента в любой сайт любого вектора, не содержит Т4 ДНК лигазу. В наборе используется метод гомологичной рекомбинации, снижающий вероятность самолигирования вектора, метод устраняет необходимость подбора сайтов гидролиза эндонуклеазами рестрикции, процент положительных клонов более 95%.
На 1 этапе вектор нужно линеаризовать, например, путем расщепления эндонуклеазами рестрикции или другим способом, добавить к концам клонируемого фрагмента последовательности длиной от 15 до 20 п. н. комплиментарные 5'- и 3'-концам полученного вектора используя ПЦР. Далее клонируемый фрагмент и линеаризованный вектор смешать в определенных пропорциях и инкубировать с ExnaseII 30 минут при 37 °C.
В состав набора ClonExpress II One Step входит Exnase II и буфер, повышающие эффективность рекомбинации. Exnase II устойчива к ингибиторам, так что, линеаризованный вектор, и клонируемый фрагмент, могут быть непосредственно использованы для клонирования без дополнительной очистки из реакционных смесей.
Преимущества набора ClonExpress II One Step
- Простое, быстрое, эффективное клонирование любого фрагмента;
-
направленное клонирование по любому сайту в любой вектор;
-
не нужно учитывать сайты рестрикции, содержащиеся в клонируемом фрагменте;
-
размеры фрагментов ДНК с эффективным клонированием — от 50 п.н. до 10 тыс. п.н.;
-
возможность клонирования без очистки линеаризованного векторов и ПЦР-продуктов;
-
не содержит лигазы;
-
положительные результаты, % — более 95.
Комплект поставки: Буфер CE II (5х), Exnase II, контрольная вставка 500 bp (20 нг/мкл), линеаризованный контрольный вектор pUC19 (50 нг/мкл).
Условия хранения: -20 °С.
