ДНК-полимераза Phusion является золотым стандартом для высокпроизводительной ПЦР. Частота ошибок у этой полимеразы более чем в 50 раз ниже, чем у стандартной
Taq ДНК-полимеразы, и в 6 раз ниже, чем у
Pfu.
ДНК-полимераза Phusion – наилучший выбор для клонирования и других экспериментов, требующих высокой точности при синтезе ДНК. Этот фермент обеспечивает стабильный выход ПЦР-продукта и быстроту проведения амплификации даже в присутствии ингибиторов.
Использование для ПЦР
ДНК-полимеразы с горячим стартом Phusion Hot Start II исключает возможность синтеза неспецифических продуктов в процессе подготовки ПЦР-смесей. Это происходит благодаря комбинации фермента со
специфическим лигандом Affibody, ингибирующим активность полимеразы при комнатной температуре. Этот лиганд также ингибирует 3’→5’ экзонуклеазную активность, предотвращая деградацию праймеров и матрицы. При нагревании реакционной смеси до определённой температуры в ходе ПЦР лиганд быстро отщепляется от полимеразы, поэтому в протоколе реакции не требуется специальная стадия активации фермента.
Наборы Phusion Green Hot Start II комплектуются 5-кратными буферами Phusion Green, содержащими утяжеляющий агент и два маркерных красителя. Это позволяет наносить продукты ПЦР на гель без добавления дополнительных реактивов для электрофореза. Утяжеляющий агент и маркерные красители инертны, не влияют на ПЦР и не мешают использованию ПЦР-продуктов в реакциях лигирования или рестрикции, а также при секвенировании.
ДНК-полимераза Phusion Hot Start II синтезирует ПЦР-продукты с тупыми концами.
Условия хранения - 20 °С.
Особенности ДНК-полимеразы Phusion Green Hot Start II:
- высокая точность синтеза (в 52 раза выше по сравнению с Taq);
-
возможность подготовки реакционных смесей при комнатной температуре;
-
отсутствие неспецифического синтеза и деградации праймеров в процессе подготовки ПЦР;
-
быстрая ре-активация полимеразы при запуске ПЦР;
-
более высокая скорость синтеза – 1 тыс. п.н. за 15-30 секунд;
-
универсальность – практически не требуется оптимизация условий ПЦР;
-
больший выход ПЦР-продукта при минимальном количестве фермента;
-
возможность нанесения ПЦР-продуктов на гель без добавления специальных реагентов для электрофореза.
Области применения:
- высокоточная ПЦР;
-
клонирование;
-
синтез ДНК для секвенирования;
-
амплификация сложных (GC-богатых) последовательностей;
- ПЦР длинных фрагментов (до 20 тыс. п.н.);
-
сайт-специфический мутагенез;
-
высокопроизводительная ПЦР;
-
мультиплексная ПЦР;
-
получение микрочипов.
В состав набора входят:
- ДНК-полимераза Phusion Hot Start II (2 Ед/мкл);
-
5Х буфер Phusion Green HF*;
-
5Х буфер Phusion Green GC*;
-
ДМСО;
-
50 мМ MgCl₂.
* в состав 5Х буферов Phusion уже входит 7.5 мМ MgCl₂.